清洁分析方法验证中擦拭回收试验
清洁分析方法验证包括分析方法和取样方法的验证，通常用擦拭回收试验来证明取样方法的有效性，擦拭回收试验如何做？擦拭溶剂如何选择？为什么方法回收率合格，而擦拭回收率不合格？此文让大家知其然，知其所以然。
1 进行清洁分析方法验证前，需要准备什么？
1.1首先，需要知道残留物控制限度。验证部门人员依据设备表面积、产品批量等信息计算出残留物的控制限度，QC人员以此当做100%的浓度。
1.2需要知道产品的清洁方法，主要关注使用的清洁溶剂，通常清洁溶剂应该能够有效的溶解该产品的API，并且不能对设备和产品以及其他产品造成污染。
1.3选择合适的棉签，原则如下：
a. 能被擦拭溶剂很好的湿润
b. 有一定的机械强度和韧性，足以对设备表面施加一定的压力和摩擦力，并不易脱落纤维
c. 能同擦拭和萃取溶剂相互兼容，不对检测产生干扰
d. 质优价量（一定要考虑公司成本）
1.4选择与车间生产设备表面材质相同的擦拭板，表面要平整、光滑、干净。
2 如何建立清洁分析方法
3 清洁分析方法验证包括哪些内容？
3.1对色谱分析方法验证：专属性、准确度、线性和范围、定量限、检测限、精密度
3.2对取样方法进行模拟验证：即所谓的取样效率/取样回收率。实际上是对棉签的选择、擦拭溶剂的选择、取样人员操作、残留物转移到棉签、样品萃取过程的全面考察。
4 清洁溶剂的选择？
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分类 |
部门 |
用途 |
选择原则 |
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清洁溶剂 |
车间 |
用于产品的清洁 |
有效溶解残留物、不腐蚀设备、廉价、且本身易被清除。 |
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擦拭溶剂 |
QC |
为QC进行模拟取样时，做擦拭回收率湿润棉签的溶剂 |
因为是模拟取样，所以QC进行擦拭取样回收率验证时，所用的擦拭溶剂应该和后续QA取样溶剂一样。 1) 溶剂不得在设备上遗留有毒物质（不能污染产品、设备、环境等） 2) 应使擦拭取样有较高的回收率（API溶解性好） 3) 不得对随后的检测产生干扰 4) 价格低廉（考虑公司成本） |
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稀释剂 |
QC |
用于稀释样品的溶剂 |
考虑供试品的溶解性、不能对检测产生干扰等等。 可以和擦拭溶剂相同，也可以和擦拭溶剂不同 |
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取样溶剂 |
QA |
用于产品清洁后，取样时湿润棉签的溶剂 |
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5 擦拭回收试验如何合理进行？
通常制备3个浓度（2LOQ、100%、200%）的待测溶液，均匀涂布在10*10cm2范围内（每个浓度涂布2-3份），采用烘干或者自然晾干的方式使其干燥，不同的2-3个人使用相同的棉签蘸取擦拭溶剂，采用相同的擦拭方法进行擦拭回收试验，计算回收率。
6 为什么要制备3个不同浓度？
因为擦拭回收试验主要是模拟设备残留物较少（低于清洁限度）和较多（高于清洁限度）时，取样方法的有效性。
7 最低浓度为什么是2LOQ，而不是LOQ？
因为擦拭回收率受到取样和检验的双重影响，所以一般要求擦拭回收率大于50%或60%，如果最低浓度不是2倍的LOQ，可能会出现0.5-0.6倍的LOQ，低于LOQ就不能准确定量，所以为2倍（实际有可能是1.0-1.2倍）
8 为什么需要2-3个不同人员进行试验？
擦拭回收率试验目的是考察不同取样人员采用相同取样方法，但是可能会受到擦拭力度、棉签与设备接触角度不同等影响而导致取样效果的差异，所以需要不同人员进行。
9 为什么擦拭溶剂一定要和取样溶剂一样？
因为擦拭回收试验的目的模拟取样，证明取样方法的有效性和重现性，所以擦拭溶剂要和取样溶剂一致。并且擦拭/取样溶剂不能污染产品，不能干扰检测。
10 擦拭/取样溶剂应该如何选择？
选择擦拭/取样溶剂时，需要综合生产工艺（使用到的溶剂等）、溶解性、溶剂的毒害性、避免引入污染物、企业成本等因素进行评估。擦拭/取样溶剂不能对产品/设备造成污染，不能引入有毒害的有机溶剂或污染物。生产过程中通常不能使用有毒害的有机溶剂（如必须使用，则需要经过合理的风险评估，同时控制有机溶剂残留量）。例如，固体口服制剂常见在湿法制粒或包衣时使用到乙醇（三类溶剂，低毒、对人类健康危害风险较低的溶剂）。基于以上原则，口服固体制剂常用水、乙醇或者二者的混合物作为清洗溶剂，故擦拭/取样溶剂也只能选择乙醇、水或者二者的混合物，如果使用其他溶剂，则需要进行风险评估，同时控制溶剂残留量。
11 擦拭回收试验的可接受标准是什么？
药品生产验证指南中一般不低于50%，业内常见不低于60%。
12 回收率不符合要求的主要原因有哪些？
a. 擦拭溶剂选择不合适
b. 人员的擦拭力度（均匀用力）、擦拭速度（要快，防止溶剂挥发）影响
c. 擦拭路径（要在涂布的10*10 cm2区域内）
d. 棉签与板的接触角度太大，导致接触面积太小
e. 其它
以上为清洁分析方法验证擦拭回收试验中常见的疑问和解答。因指导原则、指南等均仅说了要进行验证以及擦拭回收试验，或者有一些概括性的描述，具体如何合理的做，是没有具体规定或者描述的。所以只有基于风险评估的基础上合理的进行验证。
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供试品溶液 |
精密量取1ml无水乙醇（擦拭溶剂，一定要与取样溶剂相同，才能有效模拟取样效果）至25ml具塞试管中，取一支空白棉签，捻住棉签杆（注意不要接触棉签头的无纺布部分），将棉签用试管里的溶剂充分润湿并在管壁轻轻沥干多余溶剂（保持棉签湿润），使棉签充分接触设备取样点表面，在取样位置上10×10cm2的范围内进行划线（见下图1），先用棉签的一面做平行划线，再以另一面垂直于原方向做平行划线，然后将棉签无纺布一端插入具塞试管口中，用剪刀剪掉手捻过的棉签杆部分后丢弃，在具塞试管中加入稀释剂9ml（稀释剂可以与擦拭溶剂相同，也可以不同），加塞后振摇，超声10分钟，放冷至室温，即得。
图1 棉签擦拭示意图 |
参考文献：